解糖热纤维菌木糖苷酶的分离纯化及其酶学性质

摘要：

通过生物信息学分析,确定厌氧孢子菌Caldicellulosiruptor saccharolyticus编码的木糖苷酶(XYL39B)属于糖苷水解酶第2家族,是极端耐热的水解低聚木糖为木糖的关键酶.将XYL39B基因(xyl39B)导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过热处理和镍柱亲和层析获得纯酶.对纯化的重组XYL39B进行酶学性质的表征,结果表明该酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH为6.0.在pH 6.0,70℃条件下保温2h后残留相对酶活仍达90%以上,在55~75℃范围内酶活较高且比较稳定.Zn2+、Cu2+、SDS对酶活力的抑制作用较明显,其他金属离子和化学试剂对该酶的酶活力影响不显著.在以4-对硝基苯酚-β-D-木糖苷(pNPX)为底物,该酶的表观活化能为14.52kJ/mol,其Km值为11.47mmol/L,Vmax为29.4U/g,Kcat为20.60s–1,木糖对其反馈抑制较弱(抑制常数Ki为306.87mmol/L),综上结果显示该酶是活性较高且抑耐木糖抑制的细菌源极端耐热木糖苷酶.研究结果为其后续的基因改造和实际应用奠定理论基础.

关键词：极端耐热、β-木糖苷酶、解糖热纤维菌、亲和层析、酶学性质

所属期刊栏目：36

分类号：Q556.2(酶)

资助基金：国家林业局"948"项目2014-4-37;国家自然科学基金31270612,31370572;江苏高校品牌专业建设工程项目PPZY2015C22

在线出版日期：2017-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1041-1046