大肠杆菌DNA复制相关蛋白PriC的初步研究

摘要：

目的:对大肠杆菌DNA复制相关蛋白PriC进行研究.方法:构建重组表达载体pET21a-PriC及pET21a-PriC1-101,并进一步诱导表达纯化.利用Pulldown手段将pET21a-PriC-notag 与 pET28at-plus-PriB分别转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达及共纯化后检测PriC与PriB的相互作用情况.结果:PriC 经Ni柱亲和层析纯化获得的蛋白稳定性较差,易沉淀.根据二级结构和蛋白稳定性预测及限制性蛋白酶水解结果,构建了PriC的截短突变蛋白PriC1-101经Ni亲和层析和superdex75纯化,获得了稳定性较好的蛋白,经Western boot鉴定为目的蛋白.PriC1-101的圆二色谱分析发现其具有较多的α-helix和无规卷曲,这为更好的了解其结构奠定了重要的基础.通过Pulldown手段发现PriC与PriB存在相互作用,并且PriC的稳定性有所提高.结论:PriC蛋白的C-端氨基酸序列是PriC蛋白与PriB蛋白相互作用的主要区域,并对PriC蛋白的稳定性有较大影响.

关键词：大肠杆菌、DNA、蛋白PriC

所属期刊栏目：26

分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金10979005;国家基础研究项目2009CB918600

在线出版日期：2011-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：689-692