泡桐MSAP体系建立及引物筛选

摘要：

以豫杂一号泡桐组培苗为材料,通过对影响MSAP反应体系各主要因素的优化,建立了适于泡桐MSAP分析的反应体系.结果表明,最佳酶切体系(25 μL)包含300 ng模板DNA,16 U的EcoR Ⅰ和10 U的Hap Ⅱ(MspⅠ),各双酶切8h后,80℃失活20 min；最佳连接体系(25 μL)是酶切产物20 μL,0.16 μmol·L-1 EcoR Ⅰ接头,1.6 μmol· L-1 HapⅡ(MspⅠ)接头,2.5 μL 10×T4 Buffer,2UT4连接酶,22℃连接18 h；最佳预扩反应体系(20 μL)是5μL稀释10倍的连接产物,100μmol·L-1 dNTP,0.5 U Taq酶,EcoR Ⅰ和HapⅡ(MspⅠ)预扩引物各0.25 μmol·L-1,2.5 μL 10×PCR Buffer.最佳选择性扩增反应体系(20μL)为5 μL稀释30倍预扩增产物,100 μmol·L-1 dNTP,0.5 U Taq酶,EcoR Ⅰ和HapⅡ(MspⅠ)选扩引物各0.3 μmol·L-1,2.5μL 10×PCR Buffer.最后,利用优化的体系,筛选出了96对适宜于泡桐MSAP分析的引物.

关键词：泡桐、MSAP、反应体系、引物筛选

所属期刊栏目：46

分类号：S792.43(森林树种)

资助基金：国家自然科学基金项目30571496

在线出版日期：2013-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：535-541