北京长白杂交猪IgG H链基因CH2-CH3的克隆、序列分析及表达质粒构建

摘要：

根据GenBank中注册的猪IgG H链基因cDNA CH2 CH3序列(SSU03780),设计了含Kpn Ⅰ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法从北京长白杂交猪肠系膜淋巴结细胞扩增猪IgG H链基因CH2-CH3序列.将PCR产物纯化回收后,插入到含LacZ基因的克隆载体pGEM-T Easy中,转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,经KpnⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆.将所克隆的目的片断亚克隆到原核表达载体pQE 30,构建重组质粒pQE 30/PIgG CH2-CH3.将重组表达质粒转化大肠杆菌JM 109感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析.结果表明,本研究克隆了猪IgG H链基因CH2-CH3序列,全长663 bp,编码221个氨基酸,利用Gentyx version 6.0软件将CH2-CH3基因的核苷酸序列与GenBank中的参考序列比较,其核苷酸序列同源率为99.551%,推导的氨基酸序列同源率为100%.将pQE 30/PIgG CH2-CH3转化JM 109感受态细胞,表达的融合蛋白相对分子质量约为26.95 ku,经IPTG诱导2 h,表达量约占菌体总蛋白41.5%.

关键词：猪IgG、H链基因、CH2和CH3、基因克隆、DNA序列分析、原核表达

所属期刊栏目：40

分类号：S813(普通畜牧学)

资助基金：中国科学院资助项目30371098

在线出版日期：2006-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-6