刺参体内 RNA 干扰方法的初步研究

摘要：

以刺参溶菌酶基因（lysozyme gene ，LYZ）为靶基因探索构建刺参体内RNA干扰体系。构建了3个刺参溶菌酶基因特异性的RN A干扰重组质粒，以刺参体腔液原代培养细胞为靶细胞进行筛选；分别以口腔注射和腹腔注射的方式以及不同的注射剂量对刺参LYZ进行体内RNA干扰，并运用qPCR技术测定刺参LYZ的表达量；最后，对刺参LYZ进行体内RNA干扰，并分别运用qPCR技术和比浊法测定刺参LYZ的表达量及其酶活性。结果显示：3种RNA干扰重组质粒的沉默效率分别为40％、45％、0％；体腔注射RNA干扰重组质粒时，各组织中LYZ的表达量均出现了显著的上升（P＜0．05），而从口腔注射时，体腔液和肌肉中LYZ的表达量均出现极为显著的下降（P ＜0．01），而在管足中未出现明显变化；当其注射剂量为0．5μg和5μg时未对LYZ的表达产生有效的抑制作用；当注射剂量为10μg和25μg时，刺参体内LYZ的表达受到了明显抑制，但是注射剂量为25μg时，部分刺参个体出现吐肠现象；在转染12 h后，刺参体腔液、肌肉、体壁、疣足和管足组织中LYZ的表达量开始下降，到第四天后开始回升。表明：只有从口腔注射RNA干扰重组质粒且注射剂量达到10μg时才能有效地抑制靶基因的表达；刺参体内RNA干扰具有系统性，可以在各个组织间相互传导。

关键词：刺参、溶菌酶基因、RNA干扰

分类号：S917.1(水产基础科学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31072230；国家自然科学基金资助项目41106128；国家高技术研究发展计划863计划2010AA10A401。

在线出版日期：2016-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：4-11