miR-96-5p调控FOXO4表达影响人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡

摘要：

目的 探讨微小RNA-96-5p(miR-96-5p)调控叉头样转录因子O4(FOXO4)表达影响人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的分子机制.方法 取瘢痕疙瘩组织30例与正常皮肤组织15例,原代培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞与正常成纤维细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测细胞中miR-96-5p、FOXO4的表达水平.采用脂质体转染法分别将anti-miR-96-5p、anti-miR-NC、pcDNA-FOXO4、pcDNA-NC、anti-miR-96-5p与si-NC、anti-miR-96-5p与si-FOXO4转染至瘢痕疙瘩成纤维细胞,通过qRT-PCR与Western Blot法验证转染效果.甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率.双荧光素酶报告实验验证miR-96-5p与FOXO4的靶向关系;Western Blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-caspase-3)表达量.结果 miR-96-5p在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达水平高于正常成纤维细胞(P<0.05),FOXO4的表达水平低于正常成纤维细胞(P<0.05);抑制miR-96-5p表达与FOXO4过表达后,与阴性转染组相比,细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),C-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05);荧光素酶报告实验证实miR-96-5p能够抑制FOXO4的3'-UTR区荧光素酶活性;抑制FOXO4表达可部分逆转抑制miR-96-5p表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡的影响.结论 抑制miR-96-5p表达可能通过上调FOXO4的表达抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖并诱导细胞凋亡.

关键词：miR-96-5p、FOXO4、瘢痕、成纤维细胞、增殖、凋亡

所属期刊栏目：43

分类号：R619.6(外科手术学)

在线出版日期：2021-07-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2085-2089,2095