10.3969/j.issn.1006-6233.2022.07.06
携带TSP-1的脐带间充质干细胞来源外泌体对视网膜静脉阻塞大鼠视网膜变性的保护作用
目的:探讨携带血小板反应素-1(thrombospondin-1,TSP-1)的人脐带间充质干细胞(hu-man umbilical cord mesenchymal stem cell,hUCMSC)来源外泌体对视网膜静脉阻塞(retinal vein occlu-sion,RVO)模型大鼠的保护作用.方法:将hUCMSC随机分为hUCMSC组、NC-hUCMSC组、TSP-1-hUCMSC组,NC-hUCMSC组和TSP-1-hUCMSC组分别利用含TSP-1基因序列慢病毒、阴性对照慢病毒感染hUCMSC,并通过荧光倒置显微镜、实时荧光定量PCR和Western blot测定细胞转染效果;分离携带TSP-1基因的hUCMSC来源的外泌体,透射电镜观察形态,纳米粒子跟踪分析法测定直径,West-ern blot检测外泌体标志蛋白CD9、CD63及Alix的表达;采用激光光动力法建立SD大鼠RVO模型,并分为模型组、hUCMSC-Exo组、TSP-1-hUCMSC-Exo组,每组10只,另取10只健康大鼠作为对照组,给予hUCMSC-Exo组结膜下注射100μL hUCMSC来源外泌体,TSP-1-hUCMSC-Exo组注射100μL含TSP-1慢病毒感染的hUCMSC来源外泌体.RVO模型建立后1d、7d、14d、21d,观察眼底图像;21 d后,眼底血管荧光造影(fluorescein fundus angiography,FFA)检查血管病变,HE染色观察视网膜组织病理学变化,实时荧光定量PCR和Western blot检测视网膜组织内缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管细胞间黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)在mRNA和蛋白上的表达水平.结果:倒置荧光显微镜可见慢病毒转染的细胞内有明显的绿色荧光蛋白表达,且TSP-1-hUCMSC组的hUCMSC中TSP-1 mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05),表示细胞转染成功;分离的颗粒物为球状,直径大约分布在100 nm,CD9、CD63及Alix蛋白均高表达,说明成功分离到外泌体;与对照组比较,模型组大鼠眼内在造模1、7、14和21d均出现不同程度的白色闭塞血管及斑块,判定造模成功;此外,模型组视网膜血管可见静脉迂曲扩张,粗细不均,血管壁荧光着染及渗出,视网膜组织结构明显受损,组织内HIF-1α、VEGF与VCAM-1的mRNA和蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05);相较于模型组,hUCMSC-Exo组和TSP-1-hUCMSC-Exo组血管壁荧光着染现象减轻,视网膜结构恢复,HIF-1α、VEGF与VCAM-1的mRNA和蛋白相对表达量均显著下降(P<0.05);与hUCMSC-Exo组比较,TSP-1-hUCMSC-Exo组血管未见明显荧光渗漏,视网膜结构较为清晰,组织内HIF-1α、VEGF与VCAM-1的mRNA和蛋白相对表达量均显著下降(P<0.05).结论:携带TSP-1的hUCMSC来源外泌体能够减轻RVO大鼠的视网膜损伤,对视网膜起到保护作用,其机制可能与抑制HIF-1α、VEGF与VCAM-1的表达相关.
视网膜静脉阻塞、血小板反应素-1、脐带间充质干细胞、外泌体
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R394.2;R774.1;R543.3
湖北省恩施州医疗卫生类指导性项目JCY2019000006
2022-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
1080-1087
