番茄褪绿病毒 CP 基因克隆、序列分析及原核表达

摘要：

为制备番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus，ToCV）抗血清，以番茄病叶为试验材料，提取总 RNA，根据ToCV CP 基因设计特异性引物，利用 RT-PCR 方法克隆目的基因，构建原核表达载体 pET32a-ToCVCP，在大肠杆菌Rosetta （DE3）菌株中表达 CP 蛋白。结果表明：ToCV CP 基因（GenBank 登录号：KT809400）全长774 bp，编码257个氨基酸，与 GenBank 中其他地区分离物核苷酸序列同源性为97．2％～99．6％，推导的氨基酸序列同源性为97．3％～100．0％。核苷酸序列保守位点占全部位点的91．3％，氨基酸序列保守位点占全部位点的88．3％，表明不同地理来源的番茄褪绿病毒的 CP 基因保守性较高。将 ToCV CP 基因克隆到原核表达载体 pET-32a（＋）上，并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。SDS-PAGE 分析表明，转 pET32a-ToCVCP 载体的大肠杆菌 Rosetta （DE3）菌株表达了分子量约33 kDa的重组蛋白。该重组蛋白在37℃，1．0 mmol ／L IPTG、诱导6 h，表达量最大。

关键词：番茄褪绿病毒、外壳蛋白基因、原核表达、基因克隆

所属期刊栏目：31

分类号：Q78;S641.03(基因工程（遗传工程）)

资助基金：山东现代农业产业技术体系薯类创新团队项目SDAIT-10-011-06

在线出版日期：2016-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：57-62