少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶 P186基因的克隆、序列分析及表达

摘要：

根据GenBank中少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因序列设计特异性引物，运用RT-PCR扩增获得目的基因片段，构建重组表达质粒pET32a-P186，转化到大肠杆菌BL21（DE3），以IPTG进行了诱导表达。结果表明，P186基因cDNA全长为1224 bp，编码407个氨基酸，其中第1～21位为信号肽序列，氨基酸序列的第156～167位、192～202位、343～353位分别是天冬氨酸（Asp160）、组氨酸（His192）、丝氨酸（Ser345）活性位点所在区域，属于Subtilase家族，包括2个潜在的N-联糖基化位点（ Asn249、Asn342）及与底物结合的S1区（ SBP） Ser251 Ile252 Gly253和Ala277 Ala278 Gly279。SDS-PAGE分析结果显示，表达产物的分子质量约为62 kDa。 Western Blot 分析结果表明，P186重组蛋白可以与抗蛋白粗提液多克隆抗体发生反应。为了揭示少孢节丛孢菌捕食线虫的分子机制，首次克隆并表达了少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶P186基因，为进一步研究丝氨酸蛋白酶P186的生物学功能奠定了基础。

关键词：少孢节丛孢菌、丝氨酸蛋白酶P186、克隆、表达

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家农业公益行业专项子课题201303037-5；国家自然科学基金项目31260601；兵团博士资金项目2010JC09

在线出版日期：2014-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：93-97