玉米 APX 基因的克隆及其原核表达研究

摘要：

为了研究冷胁迫处理下的玉米抗坏血酸过氧化物酶的作用，根据GenBank发表的APX基因的ORF序列设计引物，利用RT-PCR从冷胁迫后的玉米自交系（ E28）叶片总RNA中经cDNA转化， pMD19-T载体的亚克隆，获得APX基因开放阅读框，长度为753 bp，编码250个氨基酸残基。生物信息学分析显示，APX 相对分子质量和理论等电点依次为27．3 kDa和5．56。将携带完整的ORF序列连入表达载体pET-28a（＋）中，APX基因经IPTG诱导后高效表达，SDS-PAGE电泳检测到目标蛋白的大小约为27．3 kDa，与预测结果一致。抗盐分析显示，重组大肠杆菌BL21（pET28-APX）的抗盐性明显高于对照菌株BL21（pET28）且其抗NaCl的临界浓度为0．6 mol/L，这为后期对作物的抗逆研究提供了科学依据。

关键词：APX、原核表达、pET28a(+)、IPTG、BL21(DE3)

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：青岛市公共领域科技支撑计划项目12-1-3-15-nsh；国家自然科学基金项目31371636；山东省农业生物资源创新利用研究课题项目；山东省现代农业产业技术体系玉米产业创新团队项目SDAIT-01-022-01

在线出版日期：2014-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：49-55