二价核酶基因构建及对PLRV负链靶序列的体外切割研究

摘要：

根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒(Potato leaf roll virus,PLRV)中国分离株(PLRV-Ch)复制酶基因负链RNA的二价核酶序列.将该核酶基因克隆到pGEM-4Z中,构建成体外转录载体pGEM-4ZDR；同时将包含核酶切割识别位点的PLRV-Ch复制酶基因cDNA近5’端的874 bp片段反向插入到pGEM-4Z中,构建了体外转录载体pGEM-4ZR5.以线性化的重组质粒pGEM-4ZDR和pGEM-4ZR5为模板,在T7 RNA聚合酶的作用下,分别转录获得核酶RNA和PLRV-Ch复制酶基因5′端负链RNA底物片段.将以上2种RNA转录物混合并经37℃保温后,检测结果表明,所得核酶RNA对PLRV-Ch复制酶基因负链RNA在体外具有较强的特异切割活性.

关键词：二价核酶、马铃薯卷叶病毒、复制酶基因、体外切割

所属期刊栏目：27

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技支撑计划项目2007BAD49B02-6;青岛农业大学人才基金630915

在线出版日期：2012-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：12-18