人可溶性DSG2胞外域蛋白的真核表达、纯化及活性鉴定

摘要：

目的:构建DSG2与人IgG Fc片段融合的分泌型真核表达载体,在293T细胞中验证其表达,纯化具有生物活性的分泌型蛋白.方法:通过PCR扩增DSG2胞外域片段基因(DSG2 extracellular domain,DSG2ex),并将其整合到真核表达质粒pCMV3-IgG1中,构建重组真核表达质粒pCMV3-DSG2ex-IgG1.将构建成功的真核表达质粒转染入293T细胞中,使细胞外分泌表达DSG2胞外域蛋白,收集细胞上清液,经亲和层析Protein A纯化后,进行Western Blotting和ELISA活性鉴定.结果:成功构建了pCMV3-DSG2ex-IgG1真核表达质粒.转染后96 h蛋白表达量最高,表达产物纯化后经SDS-PAGE电泳分析其相对分子质量在100～130 kDa之间,与预期一致,纯化的融合蛋白纯度达90％以上,含量为0.8 mg/mL.通过Western Blot检测纯化后带有IgG1标签的DSG2胞外域蛋白能被IgG单克隆抗体识别.ELISA结果显示制备的DSG2胞外域蛋白具有明显结合人55型腺病毒(HAdV-55)Fiber Knob蛋白的活性,结论:成功建立了一种简单高效的人可溶性DSG2胞外域蛋白真核表达及纯化的方法,且纯化出来了具有生物活性的DSG2胞外域蛋白,为后期其蛋白功能研究及抗腺病毒药物的研究奠定了基础.

关键词：人可溶性DSG2胞外域蛋白、真核表达、纯化、活性鉴定

所属期刊栏目：29

分类号：Q78;R914(基因工程（遗传工程）)

资助基金：南京市科技计划项目;江苏省研究生科研与实践创新计划项目

在线出版日期：2023-06-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：721-727