雷帕霉素诱导急性T淋巴白血病细胞自噬分子机制的研究

摘要：

目的:研究不同浓度雷帕霉素对急性白血病CD4+T-Jurkat细胞增殖的影响,并从自噬方面探讨其作用机制.方法:MTT法检测不同浓度雷帕霉素对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率和周期阻滞;吖啶橙染色观察自噬溶酶体的变化;转录组测序数据分析自噬相关基因的差异表达;RT-qPCR和Western Blot实验检测自噬相关基因的转录和蛋白质表达水平;FAIRE-qPCR分析自噬基因启动子区的染色质可及性状态.结果:与对照组相比,雷帕霉素呈浓度和时间依赖性方式抑制Jurkat细胞的增殖;并将细胞周期阻滞在G0/G1期,但不能有效诱导细胞凋亡.通过吖啶橙染色观察,给药后可见自噬溶酶体的数量增加.RNA-seq数据显示,雷帕霉素可以显著影响自噬相关基因的转录水平.不同浓度雷帕霉素作用于Jurkat细胞48 h后,10 nmol/L和20 nmol/L浓度的雷帕霉素可上调ULK1、ATG13、ATG16L2、PI3K3R1、Raptor基因的表达,下调MAPK1基因的表达;50 nmol/L时,下调各基因的表达水平.自噬基因启动子区域染色质可及性也随之发生改变,与基因表达变化趋势基本一致.结论:雷帕霉素能够抑制Jurkat细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞发生自噬;较低浓度的雷帕霉素促进自噬相关基因的表达,高浓度则抑制其表达.

关键词：雷帕霉素、自噬基因、细胞周期、基因表达、染色质可及性

所属期刊栏目：29

分类号：R733.71(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;海南省自然科学基金高层次人才项目;校级研究生创新科研课题

在线出版日期：2023-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：652-659