基于miR145-5p负反馈调控TGF-β1/Smads通路抑制巨噬细胞极化的实验研究

摘要：

目的:探讨miR145-5p过表达对类风湿性关节炎(RA)患者滑膜巨噬细胞极化失衡的影响.方法:取对数生长期的人单核细胞(THP-1)诱导为成M1型巨噬细胞,将RA滑膜成纤维细胞M1型巨噬细胞与共培养成滑膜巨噬细胞.滑膜巨噬细胞分为4组:RA组(空白组)、TGF-β1组(模型组)、miR145-5p过表达组(TGF-β1+miR145-5p mimics组)、miR145-5p过表达阴性对照组(TGF-β1+miR145-5p-mimics-NC组).空白组不做任何处理,其余3组均在培养基中TGF-β1处理诱导48 h.转染miR145-5p-mimic和miR145-5p-mimics-NC至共培养基中,ELISA法检测滑膜巨噬细胞IL-6、CD163表达.RT-qPCR检测miRNA145-5p、TGF-β1mRNA、Smad3mRNA、Smad7mRNA表达水平.WB免疫印迹法检测TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达.结果:与空白组比较,模型组IL-6水平上调(P<0.01),CD163水平下调(P<0.05),提示TGF-β1可诱导加剧免疫炎症反应;与miR145-5p过表达阴性对照组、模型组相比,ELISA法显示miR145-5p过表达组抑炎分子CD163明显升高(P<0.01),致炎因子IL-6表达降低(P<0.05);PCR显示miR145-5p过表达组miR145-5p mRNA表达水平明显升高,Smad3 mRNA、TGF-β1 mRNA明显降低,Smad7 mRNA明显升高(P<0.01);WB法显示miR145-5p过表达组抑炎蛋白Smad7明显升高,TGF-β1、Smad3蛋白明显降低(P<0.01);transwell小室结果证实miR145-5p过表达组显著减少巨噬细胞侵袭(P<0.01);相关性分析显示miR145-5p与Smad3负相关,与Smad7呈正相关(P<0.01).结论:miR145-5p可能通过靶向抑制Smad3蛋白,负反馈调控TGF-β1/Smads通路,抑制RA患者巨噬细胞极化,缓解免疫炎症反应.

关键词：类风湿性关节炎、miR145-5p、TGF-β1/Smads通路、巨噬细胞极化、体外实验

所属期刊栏目：28

分类号：R593.22(全身性疾病)

资助基金：安徽省高校自然科学研究项目KJ2020A0396

在线出版日期：2022-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1803-1809