疟原虫纯化新方法的研究

摘要：

目的:拟应用去白细胞输血器,建立一种快速简便纯化疟原虫的新方法,以去除宿主白细胞DNA干扰.方法:建立Pb ANKA株鼠疟模型;39只小鼠分为A组(新鲜虫血组,n=18)、B组(冻存虫血组,-80℃保存,n=16)及C组(正常对照组,n=5);应用去白细胞输血器对血样进行过滤纯化,观察比较过滤速度及血样处理(新鲜、冻存)对去除白细胞效果的影响;血细胞计数板和血涂片吉姆萨染色法计数各样本过滤前后白细胞、红细胞、原虫率并观察疟原虫形态和疟原虫密度.滤过后的血液提取DNA,PCR验证白细胞滤过效果.结果:经血细胞计数板计数,3组白细胞平均去除率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);C组红细胞的回收率高于A组,差异具有统计学意义(P＜0.05);B组则仅见原虫.白细胞过滤后疟原虫形态及密度无明显改变.PCR鉴定PbGAPDH结果A、B组均为阳性,而小鼠GAPDH均为阴性.结论:建立了白细胞输血器一步法纯化疟原虫的新方法.该方法简便、快速、廉价,是进行疟原虫分子生物学、免疫学等方面的研究不可或缺的实用技术.

关键词：去白细胞输血器、伯氏疟原虫、纯化

所属期刊栏目：20

分类号：R331(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金项目81060140;海南医学院科研启动基金项目2011011;supported by National Natural Science Foundation of China1060140;Scientific Research Foundation of Hainan Medical University011011

在线出版日期：2015-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：592-595,598