体外共培养模式下小胶质细胞影响内皮细胞紧密连接

摘要：

目的 探讨体外共培养模式下活化的小胶质细胞对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)紧密连接的影响.方法 原代培养大鼠视网膜小胶质细胞分成4组,分别用不同浓度的脂多糖(LPS)(0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL和1000 ng/mL)激活小胶质细胞24 h,通过ELISA检测LPS激活后小胶质细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.小胶质细胞接种于Transwell的上室,用含100 ng/mL LPS的DMEM/F12培养24 h后用于实验.共培养体系作如下分组:A组,上室空白,下室HUVECs;B组,上室为未激活的小胶质细胞,下室HUVECs;C组,上室为用100 ng/mL LPS激活24 h的小胶质细胞,下室HUVECs.三组培养体系共培养24 h后,将HUVECs行细胞免疫荧光染色,观察claudin 1的表达,并行Western Blot检测claudin 1和occludin蛋白表达变化.结果 四组不同浓度的LPS(0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL和1000 ng/mL)激活小胶质细胞24 h后,小胶质细胞分泌TNF-α的水平不同,分别为(16.36±3.90)pg/mL、(378.46±11.46)pg/mL、(507.11±11.20)pg/mL、(754.55±53.43)pg/mL,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);小胶质细胞和HUVECs共培养24 h后,细胞免疫荧光染色显示C组HUVECs的claudin 1的表达较A组和B组减弱;Western Blot检测共培养体系A组、B组和C组的claudin 1和occludin相对蛋白量,claudin 1蛋白相对表达量在A组、B组和C组分别为0.233±0.010、0.244±0.010、0.171±0.001,occludin蛋白相对表达量在A组、B组和C组分别为0.474±0.045、0.323±0.029、0.139±0.017,三组间比较,claudin 1和occludin的相对蛋白量差异均有统计学意义(P<0.05),C组的claudin 1和occludin相对蛋白量下调.A组和B组claudin 1的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 活化的小胶质细胞能产生大量的TNF-α,可能通过上调TNF-α的表达使HUVECs紧密连接蛋白的表达下调.

关键词：小胶质细胞、内皮细胞、紧密连接、血-视网膜屏障、肿瘤坏死因子-α

所属期刊栏目：30

分类号：R-332(医学研究方法)

资助基金：上海市闵行区自然科学研究课题2011MHZ37

在线出版日期：2019-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：548-551