携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体的构建

摘要：

目的 构建携带有凋亡素(Apoptin、VP3)、内皮抑素(Endostatin)双基因的重组腺病毒载体,为其在肿瘤治疗的应用研究打下基础.方法 将VP3基因和Endostatin基因克隆入腺病毒穿梭质粒pDC316中,将该穿梭质粒与腺病毒骨架质粒pBHGloxE1,3Cre共转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒颗粒Ad-vp3-IRES-sEndo-his.其后挑选病毒空斑获取克隆进行小剂量扩增并提取病毒DNA进行PCR、RT-PCR检查以筛选和鉴定毒种,之后大剂量扩增所选得的病毒克隆并进行纯化、测定病毒的滴度.结果 所得腺病毒经PCR、RT-PCR检测表明重组腺病毒Ad-vp3-IRES-sEndo-his包装成功.测定病毒50％组织培养感染剂量(TCID.)为5.7×109/ml,病毒颗粒滴度(VP)为1.9×1011/ml.结论 成功构建携带凋亡素、内皮抑素双基因腺病毒载体并对其进行了大剂量扩增及提纯,达到了细胞及动物实验使用的标准.

关键词：凋亡素、内皮抑素、腺病毒、载体

所属期刊栏目：23

分类号：R730.231+.3(肿瘤学)

资助基金：广东省深圳市科技计划项目医疗卫生类资金资助项目200902002

在线出版日期：2012-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5