cp4-epsps基因在毕赤酵母中的表达及鉴定

摘要：

为建立一种新的外源蛋白安全评估方法,构建转外源基因酵母是关键步骤.本研究以来源于转基因作物的抗除草剂合成酶蛋白CP4-EPSPS为研究模板,首先通过基因优化和化学合成获得cp4-epsps基因,优化后基因密码子适周性指数(CAD为0.85,GC含量为52％.目的基因克隆至毕赤酵母表达载体pPICZb,经鉴定筛选正确的重组载体pPICZb-EPSPS电击转化至毕赤酵母GS115,cp4-epsps基因通过同源重组方式整合至酵母基因组,PCR扩增酵母基因组筛选得到在正确位点发生同源重组的4株阳性菌株.随后,各阳性菌株分别于28℃、250～300 r/min培养,0.5％甲醇诱导4d后,提取各组菌株总蛋白,采用SDS-PAGE和western blotting鉴定CP4-EPSPS表达的正确性.CP4-EPSPS单克隆抗体及载体标签C-MYC单克隆抗体的westemblotting结果一致显示cp4-epsps基因在毕赤酵母GS115中成功获得表达,大小约50 ku.本实验成功构建了转cp4-epsps基因的毕赤酵母基因工程菌,为下一步开展转基因作物CP4-EPSPS成份的安全评价奠定基础.

关键词：转基因作物、外源蛋白、安全评价、cp4-epsps基因、毕赤酵母

所属期刊栏目：33

分类号：S43;S48

资助基金：环保部公益性行业科研专项201509044;感谢中国留学基金管理委员会资助201608440425

在线出版日期：2018-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：55-62