恶臭假单胞杆菌肌酐酶在大肠杆菌中的表达及其酶学特性分析

摘要：

肌酐酶(Creatininase)是肌酐酶法检测的一个关键酶,将恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida肌酐酶基因(Cre)克隆至原核表达载体pET-28a(+),通过IPTG的诱导,实现了肌酐酶Cre在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21 (DE3)的可溶性表达.表达产物经60℃加热处理、Ni-NTA亲和层析和Sephadex G-200分子筛层析,分离纯化出重组肌酐酶,回收率为29.3％,其比酶活达到489.17 U/mg,是已有文献中报道中的最高水平.进一步进行酶学特性分析,结果表明其最适反应温度为60℃,50℃以下可以稳定保存,具有良好的热稳定性;最适pH值为7.0,在pH 7.0---8.0条件下比较稳定;Cu2+会抑制肌酐酶的活性;Mn2+、Zn2+和Co2+对肌酐酶有明显的激活作用;EDTA、SDS、Tween-20、Tween-80和Trinton-100几乎对酶活力没影响;NaN3不影响酶的活力.以肌酸为底物时,酶动力学常数Km值为47.38 rnmol/L.本研究在大肠杆菌系统成功实现肌酐酶的可溶性表达,进行分离纯化并测定其酶学性质,为肌酐酶的表达和潜在工业化应用提供理论基础.

关键词：恶臭假单胞杆菌、肌酐酶、大肠杆菌、酶学特性

所属期刊栏目：33

分类号：Q93;Q53;S432.1

资助基金：国家自然科学基金;广州市创新创业领军人才百人计划项目;中央高校基本科研业务费专项

在线出版日期：2017-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：77-82