一种L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒的构建及高效表达

摘要：

目的:拟通过构建人阴道毛滴虫的L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒,并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化表达产物,从而获得重组蛋氨酸裂解酶.方法:PCR法从人阴道毛滴虫的基因组中获得L-蛋氨酸γ-裂解酶获得L-蛋氨酸γ-裂解酶基因片段,并克隆至pGEX4T -2质粒,获得重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α中,在异丙基-B-D-硫代半乳糖苷诱导下,实现高效表达,表达产物经亲和层析纯化获得重组L-蛋氨酸γ-裂解酶.结果:表达产物进行SDS - PAGE检测,结果表明在相对分子质量68000处出现高浓度的GST融合蛋白,相对分子质量与预期大小相符；薄层扫描显示重组蛋白占总菌量的33.6％.结论:人阴道毛滴虫的L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒构建成功,并成功地获得高效表达.

关键词：L-蛋氨酸γ-裂解酶、pGEX4T-2质粒、逆转录PCR、基因克隆

所属期刊栏目：34

分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：深圳市科技计划项目200903191

在线出版日期：2013-01-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：13-16