CK18基因的原核表达及蛋白纯化

摘要：

目的 采用原核表达和亲和层析的方法获得人细胞角蛋白18(CK18).方法 利用高保真聚合酶链式反应(PCR)法克隆人CK18基因的蛋白编码区,TA克隆入pMD18-T载体中;经筛选和鉴定后,将CK18基因编码区插入原核表达载体pGEX-4t-1中,构建重组质粒pGEX-CK18GST;将重组质粒导入感受态细菌Rosetta(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导CK18融合蛋白(GST-CK18)表达,并用GST亲和层析分离纯化CK18蛋白;用体外磷酸化、免疫组化等方法验证CK18磷酸化位点及其对细胞的影响.结果 成功克隆人CK18基因蛋白编码区,构建了原核表达质粒pGEX-CK18GST,表达了GST-CK18并获得纯化蛋白,体外磷酸化、免组织化学方法均证实CK18的52位丝氨酸磷酸化可以导致细胞骨架重排和细胞形态变化.结论 成功获得纯化的人CK18蛋白,为体外研究CK18和蛋白激酶之间的关系奠定了前期基础.

关键词：细胞角蛋白18(CK18)、聚合酶链式反应、基因克隆、原核表达、蛋白纯化、肝癌

所属期刊栏目：47

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金;贵州省大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2022-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1025-1030