N2a/APP695细胞表达载脂蛋白E4对线粒体自噬的影响

摘要：

目的 探讨载脂蛋白E4(APOE4)表达对N2a/APP695细胞中线粒体自噬的影响.方法 慢病毒APOE4感染N2a/APP695细胞构建表达APOE4细胞组(表达组),同时设立N2a/APP695正常细胞组(正常组)、阴性对照慢病毒空载N2a/APP695细胞组(阴性对照组),共3个实验组;培养72 h后进行嘌呤霉素筛选处理,Western blot检测细胞APOE4表达情况、线粒体融合蛋白-2(MFN2)、MFN1及线粒体分裂蛋白-1(FIS1)、线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达,激光共聚焦观察线粒体形态及细胞中胆固醇含量,免疫荧光观察线粒体与LC3Ⅱ的共定位情况.结果 成功构建表达APOE4的慢病毒感染N2a/APP695细胞;与正常组和阴性对照组相比,表达组MFN2、MFN1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),FIS1、PINK1、Parkin蛋白表达明显上调(P<0.01),LC3Ⅱ/Ⅰ比值下调(P<0.05),线粒体形态碎片化和细胞中胆固醇高,LC3Ⅱ与线粒体的共定位减少.结论 表达APOE4的N2a/APP695细胞中线粒体分裂增多、线粒体自噬关键通路障碍、自噬异常,这可能与APOE4减少胆固醇外排、细胞内游离胆固醇增多、进而破坏线粒体分裂融合平衡有关.

关键词：阿尔茨海默病、载脂蛋白E、线粒体自噬、胆固醇

所属期刊栏目：47

分类号：R34-33(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金;贵州省科技厅基础重点项目

在线出版日期：2022-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：497-503