NLRP3炎症小体对腹膜透析相关性腹膜纤维化的作用

摘要：

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体对腹膜透析(PD)相关性腹膜(PM)纤维化(PF)的作用.方法 取对数生长期的人PM间皮细胞(HPMC)分为HPMC组(不予以任何处理)、1.50％PD液(PDS)组(1.50％PDS1.5 mL)、2.50％PDS组(2.50％PDS1.5 mL)、4.25％PDS组(4.25％PDS 1.5 mL)、NC-siRNA组(转染NC-siRNA)、siRNA-NLRP3组(转染siRNA-NLRP3)及siRNA-NLRP3+4.25％PDS组(转染siRNA-NLRP3+4.25％PDS 1.5 mL),培养24 h,制作切片,采用透射电镜观察各组HPMC细胞形态学特征,采用免疫印迹法(Western blot)检测HPMC组、1.50％PDS组及2.50％PDS组HPMC细胞NLRP3、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达,检测NC-siRNA组、4.25％PDS组及siRNA-NLRP3组、siRNA-NLRP3+4.25％PDS组HPMC细胞中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、TGF-β1及白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白质的相对表达;取24只健康SD大鼠随机均分为生理盐水组、1.50％PDS组、2.50％PDS组及4.25％PDS组,100 mL/(kg·d)处理,连续6周,末次干预后取PM组织,采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠PM组织学特征,分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot检测各组大鼠PM组织NLRP3、TGF-β1、IL-1βmRNA表达和NLRP3、TGF-β1蛋白质的相对表达量.结果 生理盐水组大鼠PM组织结构较为完整、清晰,1.50％PDS组、2.50％PDS组及4.25％PDS组大鼠PM组织增厚,增生区域炎细胞浸润,局部区域见少量血管增生;与生理盐水组比较,4.25％PDS组大鼠PM组织NLRP3、TGF-β1及IL-1βmRNA表达增加(P<0.05),2.50％PDS组大鼠PM组织NLRP3和TGF-β1 mRNA表达增加(P<0.05);与生理盐水组比较,4.25％PDS组和2.50％PDS组大鼠PM组织NLRP3、TGF-β1蛋白表达增加(P<0.05);Vimentin(红色荧光)和PCK(绿色荧光)双阳性率>90％,HPMC组HPMC细胞形态结构较正常、细胞核呈不规则多边形,1.50％PDS组和2.50％PDS组HPMC细胞核呈不规则多边形、可见少量自噬,4.25％PDS组HPMC细胞中积累了与自噬相关的结构和凋亡空泡;与HPMC组比较,2.50％PDS组和4.25％PDS组HPMC细胞NLRP3、TGF-β1蛋白表达明显升高(P<0.01);NC-siRNA组、4.25％PDS组、siRNA-NLRP3组及siRNA-NLRP3+4.25％PDS组HPMC细胞的细胞器形态结构都较完整,4.25％PDS组HPMC细胞胞浆中含大量空泡,且除NC-siRNA组外、其余3组HPMC细胞均存在不同程度的自噬;4.25％PDS组HPMC细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、TGF-β1及IL-1β蛋白表达较NC-siRNA组升高(P<0.05),siRNA-NLRP3+4.25％PDS组HPMC细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1及TGF-β1蛋白表达较4.25％PDS组降低(P<0.05).结论 NLRP3炎症小体可能是预防和治疗PD相关PF的潜在靶点.

关键词：腹膜纤维化、腹膜透析、RNA干扰、大鼠细胞、NLRP3炎症小体

所属期刊栏目：47

分类号：R692(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：西宁市科技计划项目2020-M-26

在线出版日期：2022-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：404-411,425