大鼠骨髓源性耐受性树突状细胞的诱导培养

摘要：

目的 探讨使用核因子-κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN Decoy)诱导培养大鼠骨髓来源的耐受性树突状细胞(tolDC)的方法.方法 取雄性Sprague Dawley(SD)和Wistar大鼠各10只,麻醉处死SD大鼠取胫骨制备骨髓细胞悬液、培养8d获得树突状细胞(DC),分为Control-DC组[添加白细胞介素4(IL-4)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)定向诱导分化培养]、Decoy-DC组(Control-DC组基础上加5μmol/L NF-κB ODN Decoy)、脂多糖(LPS)-DC组(培养初加GM-CSF和IL-4诱导分化培养,第7天加LPS 10μg/L刺激)及LPS-De-coy-DC组(Decoy-DC组细胞培养至第7天加10μg/L LPS),采用倒置显微镜分别观察Control-DC组和Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞提取当天和培养第4～8天、LPS-DC组和LPS-Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞培养第8天DC的细胞形状、表面突起及集落等特征,采用吉姆萨染色评价培养第8天Control-DC组和Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性DC的形态特征,采用台盼蓝染色法检测Decoy-DC组SD大鼠骨髓细胞提取当天和培养第8天DC的活细胞比率,采用流式细胞术检测各组SD大鼠培养第8天时骨髓源性DC的免疫表型;麻醉处死Wistar大鼠后取脾脏淋巴细胞制备反应细胞,同时将培养第8天的Control-DC组、Decoy-DC组、LPS-DC组及LPS-Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC中加丝裂霉素C制备刺激细胞,调整刺激细胞与反应细胞比例为1:5得混合淋巴细胞,分为空白对照组(单独加混合淋巴细胞)、Control-DC组、Decoy-DC组、LPS-DC组及LPS-Decoy-DC组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组混合淋巴细胞于490nm处的光密度(OD490)值.结果 镜下Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC集落较Control-DC组少且表面突起少见,LPS-DC组SD大鼠骨髓源性的DC形态较LPS-Decoy-DC组多样;台盼蓝染色显示提取当天和培养第8天Decoy-DC组SD大鼠骨髓源性的DC活细胞率均>95％(P>0.05);流式细胞术显示各组SD大鼠骨髓源性DC的OX-62阳性表达率均>95％(P>0.05),Decoy-DC组CD80、CD86的表达较Control-DC组下调、OD490降低(P<0.05),LPS-Decoy-DC组CD80、CD86的表达较LPS-DC组下调、OD490降低(P<0.05).结论 NF-κB ODN Decoy可成功诱导培养出SD大鼠骨髓源性的高活力、高纯度的稳定的tolDC.

关键词：大鼠、免疫耐受、骨髓、树突状细胞、核因子-κB寡核苷酸诱骗剂、诱导培养

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分类号：R392.12

资助基金：国家自然科学基金地区科学基金;贵州省普通本科高校自然科学研究创新群体项目[黔教合KY字2021016;贵州省研究生教育创新计划项目[黔教合YJSCXJH2019075

在线出版日期：2021-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：143-151