弓形虫SAG1-GRA1复合基因真核表达重组质粒的构建与表达

摘要：

目的:构建弓形虫SAG1-GRA1复合基因真核表达重组质粒,并观察其在小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3细胞中的表达.方法:采用聚合酶链反应(PCR)法分别扩增弓形虫SAG1和GRA1基因片段,导入质粒载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-SAG1和pcDNA3.1(+)-GRA1,继而构建重组质粒pcDNA3.1(+)-SAG1-GRA1;设pcDNA3.1(+)-SAG1-GRA1为实验组、pcDNA3.1(+)为对照组分别转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光染色法鉴定其在NIH3T3细胞中的表达.结果:限制性内切酶双酶切及DNA测序分析结果显示,插入pcDNA3.1(+)的片段分别为1008 bp、570 bp和1578 bp,与预期的SAG1、GRA1和SAG1-GRA1复合基因分子大小相当、序列一致;免疫荧光染色法结果显示,转染重组质粒pcDNA3.1(+)-SAG1-GRA1的NIH3T3细胞内观察到较强的绿色荧光,而转染pcDNA3.1(+)的NIH3T3细胞内未见绿色荧光.结论:成功构建了弓形虫SAG1-GRA1复合基因真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-SAG1-GRA1,且该重组质粒携带的SAG1-GRA1复合基因在NIH3T3细胞中获得表达.

关键词：弓形虫属、SAG1基因、GRA1基因、基因重组、重组质粒、体外表达

所属期刊栏目：45

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：贵州省科技厅科技支撑计划项目[黔科合SY字20103145;贵州省科教青年英才培养工程项目[黔省专合字2012163;贵州省2016年大学生创新创业训练计划项目

在线出版日期：2020-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：286-291