Seipin敲低大鼠PC12细胞株的构建和对细胞凋亡的影响

摘要：

目的:构建大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞的先天性脂肪代谢障碍2型(BSCL2/Seipin)敲低细胞株,探讨Seipin敲低后对细胞凋亡的影响.方法:将PC12细胞分为空白感染组和助感染组(加助感染试剂HitansG),采用不同慢病毒感染复数(MOI)感染细胞进行病毒预感染试验筛选助感染试剂和合适的MOI;依据上述感染条件,用阴性对照病毒和Seipin-shRNA目的病毒感染PC12细胞作为阴性对照组和Seipin敲低组,同时设置正常组(正常PC12细胞),采用蛋白质免疫印迹法检测Seipin蛋白的表达;将阴性对照组与Seipin敲低组细胞用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)细胞凋亡染色法和Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡情况.结果:慢病毒MOI=100时感染效果最强,助感染试剂能增加感染效率;与正常组相比,Seipin敲低组Seipin蛋白表达水平降低(P<0.05);与阴性对照组相比,TUNEL染色结果显示Seipin敲低组发红色荧光的凋亡细胞明显增加,Hoechst染色结果显示Seipin敲低组细胞的细胞核致密浓染或碎块状致密浓染程度明显增多.结论:成功构建大鼠PC12 Seipin敲低细胞,下调Seipin蛋白表达会增加细胞凋亡.

关键词：细胞凋亡、帕金森病、PC12细胞、神经变性疾病、Seipin蛋白、基因干扰

所属期刊栏目：45

分类号：R742.5;R-332(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金;教育部科学技术研究项目;贵州省国际科技合作计划项目[黔科合外G字20137026;贵州省创新计划项目[黔教合协同创新中心201406;贵州省教育厅项目2015年贵州省普通高等学校地方病和少数民族疾病防控创新团队;贵州省科技厅计划课题[黔科合重大专项字20146008;贵州省教育厅项目[黔教合外G字201363

在线出版日期：2020-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：249-254