三种淀粉样前体蛋白胞外结构域突变体的建立及功能验证

摘要：

目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证.方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Westernblot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体分泌的影响.结果:成功获得了APP的E1结构域突变体、E1/信号肽双缺失突变体以及E2结构域突变体细胞株,且APP突变体可以正常表达和分泌,但是信号肽缺失后APP突变体可以表达、而不能分泌.结论:APP的E1和E2结构域对APP蛋白的胞外分泌无影响.

关键词：淀粉样前体蛋白、胞外结构域、突变体、信号肽、神经退行性疾病

所属期刊栏目：44

分类号：R741.02(神经病学与精神病学)

资助基金：贵州省科技合作计划项目黔科合LH字20157337;国家自然科学基金项目31660316;贵阳市人民政府-贵州医科大学科学技术联合基金GY2017-8

在线出版日期：2019-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：626-631