敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建

摘要：

目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列 (CRISPR/Cas9) 技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株.方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则, 在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA (sgRNA), 利用PX459 V2质粒载体, 构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中, 通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆, 使用CruiserTM核酸内切酶检测打靶效率, 将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养, 再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株.结果:测序结果表明重组质粒构建成功, 免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低, 与空白对照组相比, BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组.结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株.

关键词：规律成簇间隔短回文重复序列系统、基因敲除、BLM基因、MDA-MB-231细胞、乳腺癌

所属期刊栏目：43

分类号：R737.9(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金项目81360349;贵州省应用基础研究计划重大专项子课题黔科合J重大字20152003;贵州省普通高等学校创新人才团队建设项目,黔教合人才团队字2015

在线出版日期：2019-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：503-507