pGV141-ROCK2真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达

摘要：

目的:克隆人Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)基因,构建pGV141-ROCK2真核表达载体,并观察其在人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)中的表达.方法:以RT-PCR的方法获得ROCK2基因的CDS区,经XhoI、KpnI双酶切后,连接到pGV141载体中;将构建的pGV141-ROCK2真核表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将其转染入HUVEC-C中;采用western blot法检测转染后HUVEC-C中ROCK2蛋白的表达情况.结果:PCR法、双酶切法检测到的目标条带与目的条带大小一致,测序结果显示重组质粒中插入的ROCK2基因序列与GenBank编码上的编码区完全一致;与未转染重组质粒的HUVEC-C比较,转染pGV141-ROCK2载体的HUVECC中ROCK2蛋白的表达显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建pGV141-ROCK2真核表达载体,体外转染人HUVEC-C后可使ROCK2蛋白表达显著增加.

关键词：质粒、载体、内皮细胞、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶

所属期刊栏目：42

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目81372130,81301681,81301581,81471817

在线出版日期：2017-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：635-638