人Spsb1基因慢病毒干扰载体的构建及病毒包装

摘要：

目的:构建人Spsb1基因的shRNA慢病毒干扰载体,为研究该基因在肝癌细胞生长、增殖、转移和浸润中的作用打下前期基础.方法:根据shRNA的设计原则设计一段shRNA和阴性对照shRNA,化学合成DNA双链中的两条单链,通过退火和配对后与慢病毒干扰载体LV-3 (pGLVH1/GFP+ Puro)连接,阳性克隆子LV3-SPsb1测序鉴定;将LV3-Spsb1和辅助质粒pCMV-delta8.91/pCMV-VSVG共转染HEK293T细胞,转染后24 h在荧光显微镜下观察细胞转染效率;用转染后收集到的病毒液感染肝癌细胞SMMC-7721,荧光显微镜下观察细胞荧光;用1 mg/L嘌呤霉素杀死未感染的细胞,Western blot检测细胞内源性Spsb1基因表达量.结果:测序鉴定证明获得的LV3-Spsb1质粒是所需要的目的慢病毒shRNA干扰载体;通过与辅助质粒共转染HEK293T细胞后,细胞在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,提示细胞转染效率较高;病毒液感染SMMC-7721后,细胞内出现绿色荧光,证明共转染系统可以成功包装shRNA-Spsb1重组慢病毒颗粒;Western blot结果显示shRNA-Spsb1重组慢病毒能够抑制细胞内Spsb1基因表达,证明shRNA-Spsb1的确可以降低肝癌细胞内源性Spsb1基因表达,可用于后期的基因功能研究.结论:成功构建人Spsb1基因的慢病毒shRNA干扰载体LV3-Spsb1并包装出其慢病毒颗粒.

关键词：肝肿瘤、慢病毒干扰载体、脂质体、转染、Spsb1基因

所属期刊栏目：42

分类号：R361.3(病理学)

资助基金：国家自然科学基金81560390;贵州省科学技术基金黔科合J字20102,黔科合J字20142025号;贵阳医学院院基金院基金合同字第017号

在线出版日期：2017-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：621-625