大鼠PAX6基因真核表达载体构建及鉴定

摘要：

目的：构建携带绿色荧光蛋白（ GFP）报告基因及PAX6基因的重组真核表达载体，观察其在人胚肾细胞（293FT）细胞中的表达。方法：采用聚合酶链式反应（ PCR）从大鼠脑组织中获取PAX6基因，经连接T载体测序验证正确后，与真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP经SalI/BamHI双酶切后；经T4 DNA连接酶连接，获得重组质粒pEF1α-PAX6-IRES-AcGFP，用菌液PCR、SalI/BamHI双酶切及测序鉴定正确后，用脂质体法转染293FT细胞，采用倒置荧光显微镜观察GFP的表达、蛋白印迹（ Westerh blot）法检测PAX6蛋白表达。结果：重组质粒pEF1α-PAX6-IRES-AcGFP经RT-PCR和双酶切均得到大小为1269 bp的目的条带，测序鉴定该序列与GehBahk中大鼠PAX6基因序列的同源性达100%，插入基因的大小和方向正确；重组质粒转染293FT细胞后可见GFP绿色荧光，Westerh blot显示PAX6蛋白表达。结论：成功构建了PAX6真核表达重组质粒pEF1α-PAX6-IRES-AcG-FP，能在293FT细胞中表达PAX6蛋白。

关键词：绿色荧光蛋白、PAX6基因、表达载体、真核、脂质体、转染

所属期刊栏目：41

分类号：R329.2(人体形态学)

资助基金：贵州省科技厅基金[黔科合J字20152011号]；贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目黔省专合字201241号

在线出版日期：2016-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：288-293