双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用

摘要：

目的:探讨双荧光mRFP-eGFP-LC3(ptfLC3)体系在细胞自噬中的作用.方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-eGFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素(200nmol/L)处理3h,采用荧光显微镜统计,并比较两种方法转染后HEK293细胞内LC3亮点的变化.结果:不同浓度雷帕霉素处理HEK293细胞,LC3-Ⅱ蛋白和LC3-ⅡL/LC3-Ⅰ比值均增加;转染GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色亮点的数量增加;转染mRFP-eGFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色和红色亮点数量均增加.结论:双荧光mRFP-eGFP-LC3体系优于单荧光GFP-LC3体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法.

关键词：雷帕霉素、自噬、人胚肾细胞、LC3、单荧光GFP-LC3质粒、双荧光mRFP-eGFP-LC3

所属期刊栏目：40

分类号：R34-33(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金青年项目81300151

在线出版日期：2015-10-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1029-1032