CD40-siRNA慢病毒载体的构建及其对小鼠巨噬细胞的感染
目的：构建CD40-siRNA慢病毒载体，检测其对小鼠巨噬细胞J774.1的感染效率及测定J774.1细胞的CD40 mRNA水平。方法：设计1段CD40的siRNA序列，构建慢病毒载体pLL3.7-CD40-siRNA，与pMD2. G、pMDLg/pRRE和pRSV-REV按比例采用LipofectamineLTX&Plus共转染293T细胞制备病毒，感染J774.1细胞后第4、6和8天时用流式细胞仪检测其感染效率，实时荧光定量RT-PCR（ qRT-PCR）检测CD40mRNA的表达水平。结果：成功构建CD40-siRNA慢病毒载体，当pLL3.7-CD40-siRNA、pMD2. G、pMDL g/p RRE和与pRSV-REV的比例为2：1：1：1时，制备的慢病毒滴度最高；慢病毒感染J774.1细胞的效率呈时间依赖性，感染第8天时的感染效率最高；同时，pLL3.7-CD40-siRNA组CD40 mRNA的表达明显低于pLL3.7空载体组，差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论：慢病毒感染J774.1细胞的效率可以满足后续实验的要求，CD40-siRNA慢病毒载体可以抑制CD40mRNA的表达。
抗原、CD40、小干扰RNA、慢病毒载体、巨噬细胞
R725.4(儿科学)
国家自然科学基金项目30960354
2015-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
801-805,809
