MK2不同突变体的构建、表达及细胞内定位的研究

摘要：

目的:为了研究MAPK激活蛋白激酶2 (MAPK-activated protein kinase 2, MK2)细胞内定位与其功能的关系,构建了MK2不同突变体的绿色荧光蛋白融合表达载体并观察这些突变体在细胞内的定位情况. 方法:将克隆在绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上的野生型MK2(WT)通过定点突变技术构建其无活性突变体MK2(320A)和活性突变体MK2(320E),转染NIH3T3细胞,并在荧光显微镜下观察其细胞内定位情况.结果:各种MK2不同突变体经测序鉴定正确后,在NIH3T3细胞中得到高量表达.融合蛋白发出的绿色荧光表明,在静息状态下,MK2(WT)主要分布于细胞核内,MK2(320E)主要分布于细胞质内,而MK2(320A)在细胞核和细胞质中都有分布.在受到紫外线(UV)刺激后,MK2(WT)和MK2(320A)移位出核,而MK2(320E)的细胞内定位则没有发生明显的改变.结论:成功构建了绿色荧光蛋白标记的MK2不同突变体并在真核细胞中进行了表达,观察到不同突变体对MK2细胞内定位的影响.

关键词：蛋白激酶类、突变、基因表达、细胞内定位、p38丝裂原活化蛋白激酶、MAPK激活蛋白激酶2

所属期刊栏目：33

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：长江学者和创新团队发展计划IRT0731;国家自然科学基金资助30670828, 30572151, 30700291

在线出版日期：2008-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：225-228