卡地腐霉Pr1蛋白酶mini DNA文库的构建及基因片段的克隆

摘要：

目的:在本实验室已克隆得到的灭蚊真菌卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因的部分序列的基础上,继续分离该基因的全基因组序列.方法:采用构建卡地腐霉mini基因组文库的方法,首先利用已知序列设计引物,克隆得到该蛋白酶基因的部分基因组序列;然后采用限制性内切酶Xho I消化卡地腐霉基因组DNA,同时用该内切酶消化质粒pBluescript SK(-),经去磷酸化后,将基因组酶切产物克隆到载体上并转化到大肠杆菌JM109中,构建mini基因组文库.利用载体上的通用引物和根据已知序列设计的引物,进行嵌套式PCR.结果:获得一780bp的PCR产物,经克隆、测序和分析为卡地腐霉类枯草杆菌蛋白酶基因已知序列一端301bp未知序列.结论:这种方法操作简便,实验周期短,能够特异地扩增与已知位点相邻的基因组DNA.

关键词：卡地腐霉、基因组、真菌、聚合酶链反应、枯草杆菌蛋白酶类

所属期刊栏目：30

分类号：Q949.32(植物学)

资助基金：贵州省省长基金;贵州省高层次人才基金

在线出版日期：2005-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：95-98,107