腺嘌呤碱基编辑器ABE8 e多聚体的形成机制研究及抑制策略

摘要：

研究腺嘌呤碱基编辑器ABE8e(以下简称ABE8e)多聚化的成因,降低其多聚体的比例,为ABE8 e的制备提供技术支持.首先,运用分子建模软件分析ABE8 e的三维结构,了解多聚体的成因,在此基础上构建了相应的突变体ABE8e-T,并对其进行纯化,验证理论分析的正确性.在确认聚集原因后,为了降低ABE8 e多聚体的比例,针对性地优化了ABE8 e的缓冲体系.在结构信息的指导下,发现ABE8 e二聚化界面中疏水区域的曝露导致了分子间聚集.突变体ABE8 e-T(R64L/R74E)的纯化结果显示,二聚化界面进一步打开后,多聚体比例增多.缓冲体系优化结果表明,在现有缓冲体系中添加0.5 mol/L精氨酸,能中和分子表面的疏水性,从而降低了ABE8 e的多聚体比例.结论:在ABE8 e未形成二聚体的情况下,曝露了二聚化界面的疏水性区域,导致其分子间聚集,形成了多聚体.通过在缓冲液中添加精氨酸可以减弱分子间疏水作用,降低了多聚体的比例.因此,基于结构的分析方法可以精准地分析多聚体的成因,加速了下游工艺的开发,优化后的缓冲体系可为ABE8 e的纯化和制备提供有用技术支持.

关键词：蛋白质纯化、腺嘌呤碱基编辑器、ABE8 e、多聚体去除

所属期刊栏目：52

分类号：TM711;O641.3;TM341

在线出版日期：2023-01-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1-9