白念珠菌翻译起始因子蛋白Ca-tif1的表达和纯化

摘要：

本文构建了白色念珠菌体内翻译起始因子Ca-tif1的原核表达载体,纯化Ca-tif1蛋白,并测定其ATP酶活性.采用化学合成Ca-tif1序列片段,酶切并与pET28a载体对应位点连接,连接后载体转化BL21感受态细胞,IPTG诱导Ca-tif1表达,用镍离子亲和层析柱纯化目的蛋白,并采用孔雀绿-磷钼酸分光光度法测定目的蛋白ATP酶活性.结果显示,根据大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化的重组质粒pET-28a-Ca-tif1顺利表达可溶性的目的蛋白Ca-tif1,每升大肠杆菌表达产物经纯化后得到Ca-tif1 7.0 mg,纯化后的Ca-tif1具有ATP酶活性,1.25×106 U/mg.通过成功构建白色念珠菌翻译起始因子Ca-tif1的原核表达载体pET-28a-Ca-tif1,高效表达并纯化了Ca-tif1,经测定Ca-tif1具有ATP酶活性,为基于白色念珠菌翻译起始因子的一系列研究奠定了基础.

关键词：白色念珠菌、Ca-tif1、基因表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：48

分类号：R379.4;R756.5;Q786

在线出版日期：2018-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：42-46