产酸克雷伯氏菌M5al普鲁兰酶的异源表达及酶学性质研究

摘要：

普鲁兰酶（EC 3．2．1．41）是一类淀粉脱支酶，能够特异性水解淀粉中的α-1，6-糖苷键，从而提高淀粉的利用率，在以淀粉为原料的食品、纺织、生物燃料和洗涤剂等行业中具有重要的应用价值。本研究以产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca M5 al基因组DNA为模板，将PCR扩增得到的普鲁兰酶基因pulA克隆至表达载体pET28 a （＋），构建好的重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3），在培养基中添加0．5 mmol／L异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）的条件下对该酶基因进行诱导表达，经镍柱纯化获得重组普鲁兰酶用于酶学性质研究。SDS-PAGE及Western Blot检测显示普鲁兰酶基因pulA在上述大肠杆菌宿主中成功获得了表达。该重组酶最适反应pH5 ．5 ，最适温度60℃。金属离子对酶活性有一定影响。Mn2＋对酶活促进作用显著；Fe3＋、Mg2＋、Fe2＋对酶活只有微弱的促进作用，而Cu2＋对酶活造成强烈抑制。来源于Klebsiella oxytoca M5al的普鲁兰酶最适催化条件符合工业生产中淀粉糖化工艺的要求，具有应用于淀粉工业的潜力。

关键词：产酸克雷伯氏菌、普鲁兰酶、异源表达、蛋白纯化、酶学性质

分类号：Q786;Q936;Q819

在线出版日期：2015-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：36-42