嗜热脂肪地芽孢杆菌NAD激酶克隆表达及酶学性质研究

摘要：

NAD激酶能催化NAD生成NADP.本研究采用PCR技术从嗜热脂肪地芽孢杆菌基因组中获得NAD激酶基因,以pET30a(+)为表达载体、E.coli BL21(DE3)为宿主菌,实现其在大肠杆菌中异源表达,并进行酶学性质研究.结果显示,嗜热脂肪地芽孢杆菌中NAD激酶编码基因大小为816 bp,酶分子量大约为35 kD.酶学性质分析表明,来源于嗜热脂肪地芽孢杆菌的NAD激酶最适反应温度和pH分别为35℃、pH 7.5,在35℃中保温2h后仍能保持80％左右的活性.Mn2+、Ca2+对该酶有较强的激活作用,在最适反应条件下该酶的比活力为4.43 U/mg.动力学性质分析结果显示NAD激酶对底物NAD催化的Km和Vmax分别为1.46 mmol/L和0.25 μmol/(L·min).NAD激酶在大肠杆菌的异源表达为以NAD为底物生物合成NADP提供了更多生物资源.

关键词：嗜热脂肪地芽孢杆菌、NAD激酶、克隆表达、酶学性质

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分类号：Q786;Q554.9;Q965.9

资助基金：上海市研究生创新项目54-13-115-103

在线出版日期：2015-03-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：39-44