克雷伯肺炎杆菌1,3-丙二醇氧化还原酶基因克隆及表达条件研究

摘要：

1,3-丙二醇氧化还原酶是甘油歧化为1,3-丙二醇的一种关键酶.本研究从克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae)基因组中,用PCR方法克隆了其编码基因dhaT.TA克隆测序正确后,构建胞内表达载体pET-28a-dhaT和分泌表达载体pET-22b-dhaT,然后转化E.coli BL21(DE3)进行原核表达.表达部位确定、SDS-PAGE和酶活分析表明,该酶得到了高水平表达.其中使用pET-22b表达的目的蛋白大都是不溶的包涵体;而使用pET-28a表达的目的蛋白胞内可溶,占胞内可溶总蛋白的45 %,占菌体总蛋白的25 %.常规(30 ℃)诱导表达即呈现1,3-丙二醇氧化还原酶活性,但低温(20 ℃)14 h诱导显示3.7倍的酶活性.

关键词：克雷伯肺炎杆菌、1、3-丙二醇氧化还原酶基因、克隆、蛋白表达、表达部位确定

所属期刊栏目：37

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）;国家高技术研究发展计划（863计划）;教学改革项目

在线出版日期：2007-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：25-29