人类微小RNA-1246慢病毒抑制载体的构建及对宫颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响

摘要：

目的 构建并鉴定微小RNA(miRNA)-1246慢病毒抑制载体,并探讨miRNA-1246下调对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响.方法 针对miRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段设计引物并合成目的基因miRNA-1246-down,应用基因重组技术将目的基因克隆到空载质粒GV280中,通过酶切、PCR、DNA测序验证重组慢病毒质粒(GV280-miRNA-1246-down)的构建是否成功,将GV280-miRNA-1246-down、Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒,浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度,再用重组病毒液感染宫颈鳞癌细胞SiHa,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)验证GV280-miRNA-1246-down在SiHa细胞的表达情况,用嘌呤霉素筛选GV280-miRNA-1246-down稳转细胞株.将SiHa细胞分为空白组(NC组)、阴性病毒组(NC-LV组)、miRNA-1246下调组(miRNA-1246-down-LV组),用细胞计数的方法检测细胞的生长率,用Transwell检测细胞侵袭能力.结果 (1)对菌落进行PCR鉴定筛选构建正确的慢病毒载体,DNA测序证实插入的基因序列正确.(2)慢病毒将目的基因miRNA-1246-down成功导入SiHa细胞中,同时达到稳定表达,转染率达90％以上,在荧光显微镜下能直接观察到GFP.(3) miRNA-1246-down-LV组SiHa细胞增殖数低于其他两组(P＜0.05),细胞穿膜次数较其他两组减少(P＜0.05).结论 miRNA-1246慢病毒抑制载体构建成功,miRNA-1246稳定下调的SiHa细胞株建立成功.在SiHa细胞中miRNA-1246下调可抑制宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖以及侵袭能力.

关键词：宫颈癌、慢病毒、微小RNA、抑制载体、增殖、侵袭

所属期刊栏目：38

分类号：R737.33(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金8146039;广西自然科学基金2011GXNSFA018184,2015GXNSFAA139159

在线出版日期：2016-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1053-1057