慢病毒介导核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白基因沉默对人结肠癌细胞上皮-间质转化的影响

摘要：

目的 探讨慢病毒介导的核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白(NIBP)基因沉默后对人结肠癌HCT116细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 通过DNA重组技术,进行设计并构建人NIBP基因的慢病毒载体以及无关序列的Lenti-EGFP慢病毒载体,感染HCT116细胞后分别为转染组(NIBP-RNAi组)和阴性对照组(NC组),而未予转染处理的HCT116细胞则为空白对照组(CON组).将实验分为非肿瘤坏死因子-α (TNF-α)组和TNF-α组:非TNF-α组包括NIBP-RNAi组、NC组、CON组,TNF-α组包括NIBP-RNAi+TNF-α组(NIBP-RNAi+组)、NC+TNF-α组(NC+组)、CON+ TNF-α组(CON+组),其中TNF-α组均予TNF-α进行干预.检测非TNF-α组NIBP mRNA及蛋白的表达情况,以及各组上皮性钙黏附分子(E-cadherin)和神经性钙黏附分子(N-cadherin)mRNA及蛋白的表达;采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态的变化.结果 NIBP-RNAi组NIBP的mRNA及蛋白表达均显著低于NC组及CON组(P＜0.05);与CON组比较,CON+组、NC+组的细胞发生明显的EMT,E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升(P＜0.05),NIBP-RNAi组及NIBP-RNAi+组的细胞由间质细胞形态转变为上皮细胞形态,E-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显上升、N-cadherin的mRNA和蛋白的表达均明显降低(P＜0.05);而CON组和NC组比较,以及CON+组和NC+组E-cadherin及N-cadherin的mRNA和蛋白表达比较,差异均无统计意义(P＞0.05).结论 靶向下调NIBP基因表达可抑制人结肠癌HCT116细胞EMT的发生.

关键词：结肠癌、核转录因子-κB诱导激酶和IκB激酶连接蛋白、肿瘤坏死因子-α、上皮-间质转化、慢病毒

所属期刊栏目：38

分类号：R34;R735.3(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金81260365

在线出版日期：2016-08-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：753-758