促血管生成素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的：构建携带小鼠促血管生成素-1（ Ang-1）基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法化学合成小鼠 Ang-1基因经PCR扩增后亚克隆至穿梭质粒，重组质粒转化感受态细胞，所得转化子经PCR电泳分析并测序鉴定，携带外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带腺病毒大部分基因组的辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK 293细胞，反复冻融获取重组腺病毒，终点稀释法测定重组腺病毒滴度，所得腺病毒转染293T细胞48 h收集培养上清，通过 Western Blot分析Ang-1蛋白的表达。结果 PCR产物电泳分析可见大小约1．5 kbp的特征性条带，测序结果显示基因序列与GenBank提供的Ang-1序列一致，经HEK293细胞包装后腺病毒滴度为1×109 pfu／ml，转染293T细胞后培养上清Western Blot分析可见大小58 kD特征性条带，即转染后能分泌正确大小的重组Ang-1蛋白。结论 Ang-1基因重组腺病毒载体可成功构建，为进一步研究Ang-1蛋白对造血干细胞动员及血管新生的作用提供实验依据。

关键词：促血管生成素-1、腺病毒、基因重组、载体、构建、鉴定、小鼠

分类号：R784(口腔科学)

资助基金：国家自然科学基金81160075；广西自然科学基金项目0728124，2011GXNSFD018033；广西科学研究与技术开发计划项目1140003A-5

在线出版日期：2015-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：140-142,145