CRISPR/Cas9介导Smad3基因敲除对人腹膜间皮细胞增殖和凋亡的影响

摘要：

目的:以CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建Smad3基因敲除的人腹膜间皮细胞(HPMC),研究Smad3在HPMC增殖和凋亡中的调控机制.方法:利用CRISPR Design软件设计gRNA,比对后合成,构建Smad3 gRNA-PX459质粒,用Lipofectamine 3000转染细胞,嘌呤霉素筛选后用有限稀释法获得单克隆细胞株,提取DNA进行PCR扩增后测序,同时提取总蛋白,采用蛋白免疫印迹(Western blotting)检测蛋白表达情况;CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,West-ern blotting检测凋亡相关蛋白表达.结果:成功构建Smad3稳定敲除的HPMC.Smad3基因敲除后,细胞增殖率无明显变化(P＞0.05),而凋亡率从(7.92±0.26％)上升至(11.70±0.56％),促凋亡相关蛋白Bax表达量从(0.70±0.05)上调至(1.25±0.11)(P＜0.05).结论:Smad3基因在HPMC的凋亡中具有重要的调控作用.

关键词：Smad3基因、CRISPR/Cas9、人腹膜间皮细胞

所属期刊栏目：37

分类号：R692.5(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;广西自然科学基金资助项目

在线出版日期：2020-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1398-1403