miRNA-210通过HIF-1/Notch1信号通路调控乏氧乳腺癌干细胞辐射抗拒的作用

摘要：

目的 探讨miRNA-210对乏氧乳腺癌干细胞辐射抗拒的作用以及相关的分子机制.方法 实验分为 MCF-7/Stem、MCF-7/Stem+agomir、MCF-7/Stem+antagomir、MCF-7/Stem+H+agomir、MCF-7/Stem+H+antagomir、MCF-7/Stem+H+agomir+8 Gy 和 MCF-7/Stem+H+antagomir+8 Gy组.利用悬浮球法培养乳腺癌干细胞,命名为MCF-7/Stem,利用氯化钴(CoCl2)进行化学乏氧(hypoxia,H),转染miRNA-210的激动剂(agomir)和拮抗剂(antagomir)后,并给予8 Gy X射线照射.采用实时定量PCR法检测miRNA-210的相对表达;采用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色,流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;采用Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率;采用CCK-8检测细胞增殖变化;采用Western blotting法检测HIF-1α和Notch1蛋白的表达.结果 MCF-7/Stem经过乏氧后,ROS水平明显降低,并且miRNA-210表达明显增加(P＜0.05).加入miRNA-210的 agomir 和 antagomir 后4 h、12 h、24 h 和48 h 时,与 MCF-7/Stem 组相比,MCF-7/Stem+agomir 组和MCF-7/Stem+antagomir 组细胞吸光度 A450值变化不明显,而 MCF-7/Stem+H+antagomir 组、MCF-7/Stem+H+agomir+8 Gy 组和 MCF-7/Stem+H+antagomir+8 Gy 组细胞吸光度 A450 值明显降低(P＜0.05),且MCF-7/Stem+H+antagomir+8 Gy组细胞吸光度A450值降低得更明显.MCF-7/Stem细胞经过乏氧、转染和辐射后24 h,细胞凋亡率的变化与增殖具有相似的规律,与MCF-7/Stem组比较,MCF-7/Stem+H+antagomir+8 Gy 组凋亡率增加最明显(PP＜0.05).Western blotting 结果显示,加入miRNA-210 antagomir后HIF-1α和Notch1蛋白表达变化不明显,而乏氧和辐射后二者的表达均增加.结论 miRNA-210可以调控乏氧乳腺癌干细胞辐射抗拒,可能涉及到HIF-1/Notch1信号通路的调控.

关键词：miRNA-210;乏氧;乳腺癌干细胞;辐射;凋亡

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资助基金：吉林省教育厅"十三五"科学研究规划项目资助;吉林市科技创新发展计划项目;吉林医药学院博士科研启动基金项目

在线出版日期：2021-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：325-330