人源Parkin蛋白在大肠杆菌BL-21(DE3)中的异源表达和纯化

摘要：

目的 在大肠杆菌中异源表达和纯化人源Parkin蛋白.方法 构建带有人源Parkin基因的克隆载体,测序保证Parkin基因序列正确后,构建异源表达载体pET-28a/Parkin;在Escherichia coli BL21(DE3)中诱导人源Parkin蛋白过表达,采用镍亲和色谱纯化人源Parkin蛋白,用Western印迹(WB)和荧光分光光度法评价人源Parkin蛋白活性.结果 人源Parkin蛋白在E.coli BL21(DE3)中获高表达,经镍亲和色谱纯化后除去了大量杂蛋白,得到富集;WB和荧光分光光度法检测均证实异源表达的人源Parkin蛋白具有生物活性.结论 通过异源表达技术获得高纯度的且具有生物活性的人源Parkin蛋白,可用于Parkin调节剂的快速筛选与研究.

关键词：Parkin、泛素化、异源表达、蛋白纯化、检测活性

所属期刊栏目：47

分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;云南省应用基础研究计划项目;云南省中青年学术和技术带头人后备人才;云南省教育厅科学研究基金项目;云南省刘昌孝院士工作站

在线出版日期：2021-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1146-1151