伤寒沙门菌非编码RNA617的分子鉴定及其对生物膜形成的影响

摘要：

本研究旨在探讨伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)中非编码RNA617(non-coding RNA617,ncRNA617)的分子特性,并研究其对生物膜形成的影响及作用机制.采用Northern blot方法检测ncRNA617的表达,通过cDNA 5'末端快速扩增技术(5'-rapid amplification of cDNA end,5'RACE)和逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcriotion-polymerase chain reaction,3'RT-PCR)实验分析ncRNA617可能的转录起始位点和终止位点;构建ncRNA617缺陷菌株、回补菌株和过表达菌株等相关菌株,通过生物膜形成实验,观察ncRNA617对伤寒沙门菌生物膜形成的影响,并用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)分析生物膜形成相关基因表达水平的变化,综合运用生物信息学方法预测ncRNA617和差异基因的结合区域,初步分析ncRNA617发挥调控作用的机制.结果显示,伤寒沙门菌确有ncRNA617的表达,长度约300 nt,其转录起始位点位于mig-14终止密码子下游967 nt处,终止位点位于t2681起始密码子上游2378～2560 nt处.与野生对照菌株相比,ncRNA617缺陷菌株生物膜形成能力增强(P<0.05),回补菌株的生物膜形成能力恢复至野生菌株水平,过表达菌株的生物膜形成能力有所下降(P<0.05).qPCR结果表明,ncRNA617可负向调控多个生物膜形成相关基因的转录表达水平(P<0.05).经生物信息学方法预测发现,ncRNA617与差异基因有不同的结合区域.本研究结果提示,ncRNA617在伤寒沙门菌中存在,其长度约270～452 nt.ncRNA617可能通过靶向结合生物膜形成相关基因下调基因表达,从而负向调控伤寒沙门菌生物膜的生成.

关键词：伤寒沙门菌、分子鉴定、非编码RNA、生物膜

所属期刊栏目：17

分类号：R378.22(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中国博士后科学基金资助项目;江苏省高等学校自然科学研究重大项目;江苏大学青年英才培育计划

在线出版日期：2022-09-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：18-29