晚期糖基化终产物受体慢病毒重组质粒的构建及鉴定

摘要：

目的 构建晚期糖基化终产物受体(RAGE)的慢病毒重组质粒,建立稳定表达RAGE的肝癌细胞模型,以研究RAGE在肝癌发生发展中的致病机制.方法 通过PCR扩增RAGE的基因片段,将片段克隆入慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro.随后利用磷酸钙转染法将慢病毒重组质粒与包装质粒共转染HEK293T细胞包装慢病毒,收集慢病毒上清感染肝癌细胞HepG2和Huh7,用嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株.采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测RAGE表达.结果 成功扩增了RAGE基因片段,并将其插入慢病毒表达载体中.包装慢病毒感染肝癌细胞后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,稳定表达RAGE的肝癌细胞株RAGE的mRNA(P<0.05)和蛋白表达水平明显高于对照细胞.结论 采用慢病毒表达载体成功构建了RAGE过表达的肝癌细胞株,为进一步深入研究RAGE的致病机制奠定了良好的基础.

关键词：肝肿瘤、慢病毒表达载体、晚期糖基化终产物受体

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资助基金：福建省自然科学基金面上项目2018J01840;福建省卫生计生中青年骨干人才培养项目2018-ZQN-58;福建省教育厅项目JA15227;福建医科大学启航项目2016QH003Natural Science Foundation of Fujian2018J01840;Young and Middle-aged Talents Training Project of Fujian Provincial Health Commission2018-ZQN-58;Fujian Provincial Education Department ProjectJA15227;Sailing Project of Fujian Medical University Launching2016QH003

在线出版日期：2019-10-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：312-316