不同来源外泌体对肝癌生长及转移的影响研究

摘要：

目的 在肝癌原位移植瘤小鼠模型上系统评估不同来源的外泌体对肝癌生长、转移及免疫微环境的影响,为肝癌临床免疫治疗提供新的思路.方法 采用超速离心法分别获取小鼠肝癌细胞Hepa1-6及肝癌原位移植瘤小鼠(接种原位瘤后3周)血清来源的外泌体,并通过透射电子显微镜鉴定外泌体的形态.将9只接种原位瘤1周后的C57BL/6小鼠随机分为3组(每组3只),分别尾静脉注射120μl PBS(对照组)、Hepa1-6细胞来源的外泌体(1μg/μl)(TEXcel组)、肝癌原位移植瘤小鼠血清来源的外泌体(1μg/μl)(TEXserum组),每周注射1次,连续注射3周.末次注射后第4天处死小鼠,剖取肝癌组织和肺组织,测量肝癌组织的体积;蛋白质印迹法(Western Blot)检测肝癌组织中程序性细胞死亡蛋白-1配体(PD-L1)的表达;免疫组化染色检测肝癌组织中CD3+、FoxP3+T淋巴细胞的浸润情况;苏木素-伊红染色检测肝癌肺转移情况.结果 Hepal-6细胞来源的外泌体和肝癌原位移植瘤小鼠血清来源的外泌体直径均在100 nm左右,呈均一的囊泡状,且具有完整的膜结构.与对照组相比,Hepa1-6细胞来源的外泌体对肝癌生长及肺转移具有一定的抑制作用;而TEXserum组与对照组无明显区别.Western Blot检测结果显示,与对照组相比,TEXcel组和TEXserum组肝癌组织中的PD-L1蛋白表达均明显上调.免疫组化染色结果显示,与对照组相比,TEXcel组和TEXserum组肝癌组织中FoxP3+标记的调节性T细胞(Treg)浸润数无明显变化,差异均无统计学意义(均P>0.05);但CD3+标记的T淋巴细胞浸润数明显减少,差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 Hepa1-6细胞来源的外泌体对肝癌生长和肺转移具有一定的抑制作用,但对肝癌免疫微环境无明显调控作用;而肝癌原位移植瘤小鼠血清来源的外泌体能促进肝癌生长、肺转移及免疫抑制微环境.Hepa1-6细胞来源的外泌体有望用于肝癌的免疫治疗研究.

关键词：外泌体、肝癌、生长、转移、免疫微环境

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资助基金：天津医科大学科学基金2014KYQ20 Scientific Research Fund of Tianjin Medical University 2014KYQ20

在线出版日期：2018-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：148-153,159