LSD1过表达及去甲基化作用缺失质粒的构建与鉴定

摘要：

目的 评估赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(LSD1)过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在人胚肾细胞HEK293T中的表达水平.方法 采用PCR扩增LSD1片段,重叠PCR扩增LSD1去甲基化作用缺失片段,构建大鼠特异性LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒,并经琼脂糖凝胶电泳和测序进行验证.将验证后的两种重组质粒与空白载体分别进行包病毒,感染HEK293T后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞,再用Westem Blot和实时定量PCR检测稳定表达的HEK293T细胞内LSD1的表达情况.结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明,LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒构建成功.Western Blot和实时定量PCR检测结果显示,与空白对照组相比,LSD1过表达组和LSD1去甲基化片段缺失组HEK293T细胞中LSD1蛋白及mRNA的相对表达量均上调,差异均具有统计学意义(均P＜0.01).结论 构建的LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在HEK293T细胞中实现了LSD1基因的过表达,为进一步研究LSD1基因与相关疾病的关系以及LSD1去甲基化作用奠定了基础.

关键词：赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1、去甲基化、重组质粒

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资助基金：国家自然科学基金81500170,81702637,31701126;天津市自然科学基金15JCYBJC25400,16JCQNJCl2100,16JCQNJCl0300;天津市高等学校科技发展基金计划项目20130103;天津医科大学科学基金2015KYZQ01;中国博士后科学基金2017M611174;教育部留学回国人员科研启动基金资助项目 National Natural Science Foundation of China81500170,81702637,31701126;Natural Science Foundation of Tianjin15JCYBJC25400,16JCQNJCl2100,16JCQNJCl0300;Science and Technology Development Fund for Tianjin Colleges and Universities20130103;Science Foundation of Tianjin Medical University2015KYZQ01;China Postdoctoral Science Foundation2017M611174;Scientific Research Foundation for Returned Scholars,Ministry of Education of China

在线出版日期：2018-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：26-31,37